Содержание
При проведении скрининга используются стандартные эритроциты ID-DiaCell I-I-III, предназначенные для диагностики in vitro антител к эритроцитарным антигенам.
Образцы эритроцитов:
- пригодны к использованию;
- являются 5 % взвесью крови человека, которая получена от одного донора;
- расфасованы во флаконы по 10 мл;
- хранятся при температуре от 2 до 8 °С.
Срок годности тест-эритроцитов указан на этикетке.
Обязательным является обследование биологических материалов на наличие инфекции:
- HBS антиген;
- HCV;
- HIV.
Однако ни один из современных методов не даёт полной гарантии отсутствия инфекции, поэтому любые манипуляции с биологическими препаратами являются потенциально опасными.
Приготовление образцов для скрининга
Для проведения реакции используется плазма или сыворотка. Посредством венопункции осуществляется забор крови, которая впоследствии должна быть стабилизирована. Для стабилизации применяются:
- цитрат-содержащие консерванты;
- ЭДТА;
- гепарин;
- CPD-A.
Наибольшая вероятность получения достоверных результатов возникает при использовании свежеприготовленной крови.
Если для приготовления образцов используется сыворотка, то необходимо предварительное центрифугирование с целью удаления остатков фибрина, которые могут повлиять на результат исследования. Сыворотка помещается в центрифугу на 10 минут и вращается со скоростью 1500 оборотов в минуту.
Хранение образцов плазмы или сыворотки допустимо:
- при температуре 2 — 8 °С — не более 2 суток;
- при температуре минус 20 °С — более длительный срок.
Методика проведения скрининга
Перед проведением исследования необходимо выдержать исследуемые образцы и стандартные эритроциты до достижения комнатной температуры. Затем флакон с эритроцитами аккуратно встряхивается до получения гомогенной взвеси.
Методика проведения скрининга антител включает несколько этапов:
- установка в штатив пронумерованных тонкостенных пробирок (высота до 10 см);
- проверка соответствия нумерации и числа образцов эритроцитов нумерации и числу пробирок;
- введение в каждую пробирку по 1 капле стандартных эритроцитов (0,05 мл);
- добавление в каждую пробирку по 2 капли 10 % раствора желатина (0,1 мл), который следует предварительно подогреть до достижения разжиженного состояния;
- добавление в каждую пробирку одной-двух капель сыворотки;
- перемешивание содержимого пробирок путём встряхивания;
- помещение в водяную баню на 15 минут (температура 45 — 48 °С) или на 45 минут в термостат;
- добавление 5 — 8 мл изотонического раствора;
- одно-, двукратное переворачивание пробирок с целью перемешивания и выявления отсутствия (наличия) агглютинации эритроцитов.
Оценка результатов исследования
Если агглютинация не видна невооружённым глазом, содержимое пробирок необходимо изучить под микроскопом. Агглютинация в пробирках со стандартными эритроцитами означает наличие антител в исследуемой сыворотке. Если агглютинация не выявлена ни в одной из пробирок, значит, антиэритроцитарных антител в сыворотке нет.
Определение титра антител
К разведениям сывороток (1:2 — 1:1024) в каждую из 10 пробирок добавляют по две капли стандартных эритроцитов и по две капли желатина. После встряхивания, помещения пробирок в водяную баню (термостат), добавления раствора NaCl проверяется наличие агглютинации. Титр антител является последним разведением, в котором произошла агглютинация. Наличие агглютинации во всех разведениях сыворотки указывает на то, что титр антител более чем 1:1024.
Приобрести стандартные эритроциты Вы можете напрямую у производителя в Фонде «МеДиКлон» в Санкт-Петербурге.
